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高效液相色譜柱是色譜分離的核心。一支合適，穩(wěn)定，高效的色譜柱對建立普適性強，重現性好的方法是不可少的。因色譜柱是消耗品，隨著使用時間或進樣次數的增加，會出現色譜峰高降低，峰寬加大或出現肩峰的現象，一般來說是柱效的下降。此時需要對色譜柱進行再生：(1)反相柱的再生，采用以甲醇:水=90:10(V/V),純甲醇，異丙醇，二氯甲烷等溶劑作流動相，順次沖洗，每種流動相流經色譜柱的量為20~30倍色譜柱體積然后再以相反順序沖洗色譜柱。(2)正相柱再生。順次以正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲...

高效液相色譜柱性能影響因素有很多，例如，硅膠純度、色譜柱尺寸、顆粒形狀、粒徑、表面積、孔徑，化學性質包括鍵合類型、碳覆蓋率、封端，在選擇高效液相色譜柱之前，先多了解自己的樣品和雜質，他們的類型結構、極性、酸堿性、分子量大小等等。1.樣品是極性的且弱酸性的;就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測，即要選擇承受100%純水且對極性化合物保留很好的色譜柱。2.如果樣品極性太強，或酸性太強;可以選擇CN，NH2，或硅膠柱，HILIC(親水色譜)，也有使用C18+強陰離子對試劑...

高效液相色譜柱的鍵合基質分為硅膠基質、聚合物基質等，其中硅膠基質應用較為廣泛，其特點主要包括以下3方面：(1)低pH值，硅膠鍵合鍵容易水解(pH8)。(2)在接近中性的條件時，硅醇基裸露，顯酸性，不適宜分離堿性化合物。(3)某些硅膠被一定金屬污染，這些金屬會引起峰的不對稱或拖尾，甚至化合物的死吸附。高效液相色譜柱的硅膠基質可分為全多孔硅膠微粒、雜化硅膠顆粒和實心核硅膠顆粒。1、全多孔硅膠基質：全多孔硅膠，以其全多孔的結構特點具有很高的比表面積，故具有很高的柱效。其機械強度大的...

反相色譜是迄今在高效液相色譜中應用*泛的技術，主要是因為它適用于分析絕大多數的非極性物質和很多的可離子化的及離子化合物。如果污染是因為重復進樣時強保留物質的累積引起的，利用簡單的清洗步驟來除去這些污染物往往就能恢復其色譜性能。經過等度運行后的高效液相色譜柱，有時用90～100%含量的溶劑B(雙溶劑反相系統中洗脫能力較強的溶劑，如甲醇、乙晴、四氫呋喃等)沖洗20個柱體積可以清除污染物(色譜柱的柱體積和空柱管體積概念不同，一根4.6x250mm柱子的柱體積只有2.5ml，2.1x...

液相色譜柱是液相色譜分離能力的核心部分，其化學性質參數包括以下幾個方面：1、硅膠基質硅膠基質是通用的基質，強度大，化學修飾容易，但使用的pH值范圍有限(一般為2—8，特殊修飾的可以達到1—12)。2、聚合物基質聚合物基質多為聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂，化學穩(wěn)定，應用pH范圍寬，具有更強的疏水性，對蛋白質等樣品分離效果較好;但強度較小，有機溶劑可能導致聚合物溶脹而受損，批次重復性較差，商品化色譜柱不多，一般價格較貴。3、載碳量載碳量是基質表面鍵合相的比例，載碳量高，則...

離子色譜柱是一種用來改善在反相色譜中保留較差的強極性物質保留行為的色譜技術。它通過采用強極性固定性，并且結合高比例有機相/低比例水相組成的流動相來實現這一目的。而這樣的流動相組成尤其有利于提高電噴霧離子化質譜的靈敏度。離子色譜柱的分離機制：分離機理在目前還存在著爭議，主要包括以下三個方面：(1)分配機理(2)離子交換(3)偶極-偶極相互作用。更多的試驗現象則表明HILIC色譜柱的保留機理包含氫鍵作用、偶極作用和靜電作用等多種次級效應，很難將其區(qū)分開來。影響離子色譜柱保留的主要...

色譜柱在使用前，最好進行柱的性能測試，并將結果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報告中的條件進行，只有這樣，測得的結果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。樣品的前處理過程：(1)最好使用流動相溶解樣品。(2)使用預處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產生不可逆吸附的雜質。(3)使用0.45μm或0.22μm的過濾膜過濾除去微粒雜質。實際使用中，液相色譜柱有可能會失效，常見的原因有：1、色譜柱...